产品货号：K55001

产品规格：500T

储运条件：BSA   Standard-20℃ 保存，其它组分4℃保存；冰袋运输。

产品介绍

Ultra-Fast 5-Min BCA Protein Assay Kits 是一款基于创新螯合技术的高效蛋白质浓度检 测工具，其原理与传统 BCA  法同源，但通过突破性的螯合剂优化，实现了检测效率与性能 的双重升级，适用于科研、生物制药及临床检测等领域的蛋白质定量分析。在碱性条件下， 蛋白质分子中的肽键与铜离子(Cu²+) 发生络合反应，促使 Cu²+ 被还原为亚铜离子(Cu+)。 本试剂盒采用全新特异性螯合剂替代传统 BCA  试剂，该鳌合剂可在室温下快速捕获 Cu+,  以1:2的摩尔比形成稳定的橙黄色水溶性复合物。此复合物在480 nm 波长处具有强烈吸  光特性，其颜色深浅与蛋白质浓度呈严格的线性正相关，通过测定吸光度即可精准计算样品 中的蛋白质含量。配套即用型蛋白质标准品溶液(系列浓度预配完成),无需稀释，可直接 绘制标准曲线，快捷省时。

应用范围：蛋白定量

产品特点

1. 极速显色：室温5分钟极速显色，高效省时；

2. 极简操作：即用标准品免稀释，操作便捷；

3. 精准可靠：数据重复性与准确性双高；

4.  宽域灵敏检测：线性范围 20~2,000 μg/mL;

5. 多元兼容：兼容金属离子、螯合剂及常见去污剂。

产品组分

注：本品 C 、D 、E 、F 、G 、H 、IJ          组分为无色液体，无沉淀； A  组分为淡黄色液体，

无沉淀；B 组分为蓝色液体，无沉淀。

注意事项

1. 蛋白标准溶液提前放到室温融化，并且上下颠倒混匀，所有试剂在使用前均恢复至室温 后使用。

2. 建议每次测定蛋白样品时，都要绘制标准曲线，使测量结果准确，条件允许时，每个标 准 品 (Standard)   和待测样品均建议测定≥2个平行反应(至少复孔),以提高测量的准 确性。

3. 加入工作液于室温条件反应5min 后，务必在30 min 内读数，否则将超出酶标仪测量 度数范围。

4. 建议使用多道移液器快速准确地加入工作液，避免同批次实验不同孔位间出现1 min 以 上的时间差导致试剂反应进度差距过大。

5.  当组分B(Reagent      B) 加入到组分A(Reagent      A)  时，开始可观察到有浑浊产生，属于正常现象，经搅拌后浑浊会迅速消失，得到绿色澄清工作液。

6. 本产品支持酶标仪微孔法与分光光度计比色皿法检测蛋白浓度。采用分光光度计时，需 依据比色皿最小检测体积调整 BCA  工作液用量(确保不低于其最小体积),样品及 Standard 用量需按同比例放大。受此影响，使用分光光度计检测时，单个试剂盒可测定 的样品数量会显著减少。

7. 本产品仅限于科研用途并且不得存放于普通住宅内。

8. 为了您的安全和健康，请遵循您所在常规实验室安全规定

操作步骤

以微孔板酶标仪检测为例：

1.  将酶标仪打开预热20min  以上，检测波长设置为480 nm。

2.BCA  工作液配制

1)计算确定所需的工作液总体积

BCA 工作液总量=(BSA  标准品 (BSA Standard) 样本个数+待测样本个数×稀释梯度数) ×复孔数×每个样本所需 BCA  工作液的体积。

例如：试剂盒需要做 BSA 标准品(BSA Standard)样本个数为8个，待测样本个数为3个， 每个样品稀释3 个梯度，复孔数为2个。 BCA  工作液总量=(8个 BSA 标准品 (BSA   Standard) +3 待测样本×3+多制备1)×2×200=7.2mL。

2)根据计算出的 BCA  工作液的体积，将组分 A(Reagent    A) 与组分 B(Reagent     B) 按 照 5 0 : 1 的体积比，配置成 BCA 工作液，并充分混匀。例如：在7mL  组分 A(Reagent   A) 中加入140 μL 组分 B(Reagent  B)。

注：a. 当组分 B(Reagent     B) 加入到组分 A(Reagent      A) 时，开始可观察到浑浊产生，属

于正常现象，混匀后浑浊迅速消失，得到绿色澄清工作液。

b.BCA 工作液建议现配现用，在室温条件下，该溶液颜色会逐渐加深，1.5小时内使 用，不会影响定量检测的准确性。

c.建议配制 BCA 工作液时，多配制1~2个孔的使用量。

3. 定量检测

1 ) 取 BSA  标准品 (BSA     Standard)①~⑧ 各20μL,  加入到96孔透明板中，做复孔；

2)若不确定待测样品浓度是否在线性范围内，则使用1×PBS 或生理盐水将样品稀释多个 梯度(如倍比稀释至2倍、4倍、8倍和16倍),分别各取样品20 μL 加入到96 孔板 中；

3)在每个孔中加入200 μL 工作液充分混匀30s, 盖上96 孔板板盖或使用不透明封板膜封 板，室温孵育5min;

注：由于反应速度较快，请在30 min 之内完成酶标仪检测读数。若必须在30 min 后才能

检测读数，可提前加入50μL1MHCI    终止反应。

4)用酶标仪读取每个样品及标准品在480 nm 处的吸光值，计算时应减去空白对照(标准 品 (Standard)   ⑧+   工作液)的吸光值；

5)绘制标准曲线，计算待测样品中的蛋白浓度。

典型标准曲线