ECL 化学发光液（特超敏）

产品简介：

        ECL 化学发光液（特超敏）是一款高灵敏度的增强型化学发光(ECL)HRP底物，可帮助用户在免疫印迹分析过程中实现低于皮克级的蛋白检测(<1×10-12g)，极其节省抗体。EZ ECL pico底物可为使用辣根过氧化物酶(HRP)偶联物的免疫印迹实验提供明亮的信号和低皮克级检测灵敏度。该ECL底物能够兼容各种膜、封闭液和宽范围抗体稀释液，以出色性能、通用性和高性价比，满足用户的免疫印迹应用需求。

产品货号：E2200

产品规格：100ml 500ml

保存条件：4℃避光保存，有效期24个月。

产品组份：

用途：

用于 HRP 标记抗体的 Western Blot 和 HRP 标记探针的核酸杂交。

产品特点：

1 、 低皮克级灵敏度： 检测硝化纤维素膜或 PVDF 膜上低皮克级的蛋白条带；

        2 、长信号持续时间： 在条件优化情况下 ，经底物孵育的印迹条带能够持续输出 6-8 小时的可检测光信号；

3 、 稳定试剂： 工作液在 24 小时内保持稳定；

4 、 成像方法： 适用于 X 射线胶片 、 CCD 或激光凝胶成像仪；

5 、 价格经济： 针对稀释的抗体浓度条件进行了优化：

0.2 至  1.0 µg/mL 一抗（ 以 1 mg/mL 储存液稀释 1:1,000 至 1:5,000 倍）

10 至  50 ng/mL 二抗（ 以 1 mg/mL 储存液稀释 1:20,000 至 1:100,000 倍）

6 、 简单易用： 可替代其它公司的 ECL 发光底物 ， 操作步骤无需进行特别优化；

使用方法 :

1 、 执行常规 SDS-PAGE 、 转膜和 Western Blot 步骤。 注意用 HRP 标记 IgG 或用一抗-链亲和素-生物素-HRP 夹法。

2 、Western Blot 最后一次洗膜的同时配制发光工作液： 分别取等体积的 A 液和 B 液 ，放入干净容器中混合（注意吸取 A 液和 B 液的吸头一定要分开 ，避免试剂污染） 。 建议立即使用工作液 ， 每cm2膜使用0.01~0.1 mL工作液，工作液可以在温室下稳定8 h。

3 、 Western Blot 最后一次洗膜后 ， 用镊子将膜取出 ， 用滤纸吸去多余的洗涤液（切勿接触膜的蛋白面） ， 然后置于一洁净保鲜膜上或塑料容器内。

4 、 根据膜的大小 ， 按比例滴加配置好的 ECL 工作液到膜上 ， 确保工作液均匀覆盖在膜上 ， 放置 1-3 分钟。

5 、取膜 ，用滤纸吸去多余的液体 ，将膜放在两片保鲜膜中间 ，随后进行压片检测或化学发光成像仪检测。

6 、 压片检测： 将膜固定于 X 光胶片暗盒内（注意蛋白面向上） 。 暗房内压 X 光胶片，分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。 显影冲洗。

7 、 化学发光成像仪检测： 将膜放置到化学发光成像仪内 ， 参考仪器说明书进行检测。

注： 建议第一次曝光  60  秒 ， 之后可调整曝光时间以达到最佳结果。 化学发光反应在底物孵育后的前  5-30 min 期间是最强烈的。这一反应可以持续几个小时，但强度会随时间下降，如有底物孵育后较长时间后曝光 ， 曝光时间可能需要延长以获得较强信号。

注意事项：

为获得最佳效果 ，需优化该系统 ，包括样品量 、一抗和二抗浓度 、膜和封闭试剂的类型。

1 、 没有一种封闭试剂对所有系统而言都是最佳的 ， 所以为每一个免疫印迹检测系统找到最合适的封闭缓冲液非常必需。

2 、 使用亲和素/生物素检测系统时 ，避免使用牛奶作为封闭试剂 ，牛奶中含有的不定量内源性生物素会导致高背景信号。

3 、 实验中避免印迹膜变干。

4 、 叠氮钠是  HRP   的抑制物 ， 不要使用叠氮钠作为缓冲液的防腐剂。

5 、 避免手与膜直接接触 ， 实验过程应戴手套或使用干净的镊子。

6 、 短时间暴露于实验室常规照明不会损害该工作液 ， 但应避免长期暴露在强光下。